α突觸核蛋白操作指南(4)—沉降測試實(shí)驗(yàn)步驟

更新時間：2026-03-06 點(diǎn)擊次數(shù)：283次

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沉降測試實(shí)驗(yàn)步驟

StressMarq Biosciences Inc

1. 將40μL的PFF移入微量離心管中(最-好是螺帽管）。

2. 最-大速度離心60分鐘。

3. 小心將上清液 (40μL) 轉(zhuǎn)移到新管中。添加10μL的5X Laemmli緩沖液并標(biāo)記為“上清液"。

4. 將沉淀懸浮于40μL PBS中，再次最-大速度離心30分鐘。保存上清液并標(biāo)記為 “洗滌" 。

5. 將沉淀物懸浮在40μL PBS 中并標(biāo)記為 “沉淀物" ，向該部分添加10μL 5X Laemmli 緩沖液。

6. 90°C 孵育10分鐘。

7. 分別加樣10μL “上清液"，“洗滌"和“沉淀物"于15孔梳SDS-PAGE凝膠，然后進(jìn)行SDS-PAGE。考馬斯亮藍(lán)染色和脫色。我們希望大部分的alpha突觸核蛋白(>75%)存在于“沉淀物 "中。

注意：原始操作步驟建議使用40μL，但我們發(fā)現(xiàn)20μL也可以，并能節(jié)省樣品。此外，我們有時會在第二次離心時運(yùn)行60分鐘，而不是建議的30分鐘，以確保獲得更好的沉淀物。該沉降試驗(yàn)應(yīng)在在原纖化結(jié)束時進(jìn)行，之后再稀釋和分裝。

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